一、测试前准备（基础保障）

1. 真空与环境

• 真空达标：开机抽真空≥2 小时，UHV 需低于 10⁻⁷ mbar；Bakeout（12 小时）后，FT 分析器需稳定≥8 小时，真空降至10⁻¹⁰ mbar 级再测试。

• 环境控制：温度 20–25℃（波动≤±1℃），湿度 40%–60%；远离振动源、强电磁场与通风口，避免气流直吹仪器。

• 气体合规：氮气压力800±30 kPa（8±0.3 bar），纯度≥99.999%；严禁漏气，开机前检查钢瓶与管路。

2. 校准与调谐（数据准确前提）

• 日常校准：每日做质量校准，受控环境可放宽至每周；每月做系统校准，保证24 小时内质量偏差＜3 ppm。

• 调谐合格指标：

• 正离子模式：NL＞1.0e8，IT＜5 ms，特征峰（m/z 195、524、922–1822 等）清晰。

• 负离子模式：NL＞1.0e8，IT＜5 ms，特征峰（m/z 265、514、980–1880 等）清晰。

• TIC 波动＜10%（正离子＜7% 更佳），无明显漂移。

• 调谐要点：

• H-ESI 探针装配正确、针位精准，喷雾电压适配（正离子约 4.5 kV，负离子约 3.5 kV）。

• 离子传输毛细管入口清洁，无堵塞 / 污染；管线无气泡、无泄漏。

二、样品与溶剂（污染控制）

• 样品前处理：

• 不含盐、缓冲盐、DMSO/THF/DMF 等高抑制基质；必要时固相萃取（SPE）或固相微萃取（SPME）净化，过滤（0.22 μm，MS 兼容滤膜）。

• 浓度适配：避免过浓导致离子抑制或检测器饱和，一般样品浓度 ng/mL–μg/mL 级，可先稀释 10–100 倍预实验。

• 溶剂规范：

• 仅用 LC-MS 级 / Optima 级溶剂（乙腈、甲醇、水等），严禁含不挥发性杂质的溶剂。

• 流动相需脱气（超声 / 氦气脱气），防止气泡导致喷雾不稳定或信号中断。

• 防交叉污染：

• 高浓度样品后用空白溶剂充分冲洗（≥10 倍柱体积），设置洗针程序。

• 序列中插入空白与质控样品，监控残留；RSD＞15% 时延长冲洗时间或更换色谱柱。

三、离子源与接口操作（信号稳定关键）

四、数据采集设置（方法优化）

1. 扫描参数

• 分辨率选择：

• 全扫描（FS）定性：70,000（m/z 200），配合锁质量，提升同位素精细度。

• 极性切换 FS：降至35,000，保证循环时间与数据点密度。

• PRM 定量：17,500即可，依靠 MS² 选择性保证特异性。

• AGC 与注入时间：

• AGC 目标：全扫描 1e6，MS² 1e5；避免过高导致空间电荷、过低损失灵敏度。

• 注入时间：＜50 ms（常规＜10 ms），防止饱和与分辨率下降。

• 锁质量：正离子 m/z 371.1012，负离子 m/z 429.0887；开启后质量精度提升至 **≤1 ppm**。

2. 序列与质控

• 序列编排：空白→低浓度→中浓度→高浓度→空白，减少残留影响。

• 质控（QC）：每 10 个样品插入 1 个 QC，偏差＞**±15%** 时停止分析，排查系统问题。

• 数据后处理：Xcalibur 软件中启用质量轴校正、基线扣除、同位素匹配，确保结果可靠。

五、测试中监控与异常处理

• 实时监控指标：

• TIC 稳定性：波动＞10% 时检查喷雾、气流、毛细管清洁度。

• 质量精度：连续 3 个 QC 偏差＞3 ppm→立即重新校准。

• 灵敏度：信号强度下降＞50%→检查离子源污染、管路泄漏或泵流速异常。

• 常见故障排查：

• 无信号：确认喷雾电压 / 气流开启、探针位置正确、管路无堵无漏。

• 质量漂移：环境波动→控温；未校准→执行质量校准；离子源污染→清洗探针与毛细管。

• 高背景：溶剂不纯→更换 LC-MS 级溶剂；离子源脏→Bakeout 并清洗接口部件。

六、安全与关机规范

1. 安全操作

• 高压防护：操作离子源时先断高压（Standby 模式），佩戴无粉手套，避免触电。

• 化学安全：有机废液分类收集，通风橱内处理高挥发性溶剂；THF 等易燃溶剂必须用氮气，严禁空气接触。

• 机械安全：分子涡轮泵运行时禁止开盖；关机后等待≥15 分钟，待泵停转再断气。

2. 关机流程

1. 停止数据采集，关闭液相流路。

2. Tune 中设为 Standby（关高压、鞘气 / 辅助气），关闭软件。

3. 关闭电子开关（Electronic Switch），再关真空泵开关。

4. 等待≥15 分钟后，关闭氮气钢瓶减压阀。

七、日常维护（延长寿命）

八、关键阈值速查表（快速自查）

总结