一、样品与靶向物基本要求

1. 靶向物信息（必须提供）

• 分子式 / 精确分子量（单同位素质量，用于质量数匹配）Thermo Fisher Scientific

• 结构式（确认离子化位点、碎片规律）

• 预期保留时间（LC 体系）或 沸点 / 热稳定性（GC 体系）

• 离子化模式：ESI±、HESI±、APCI 等（优先提供）

2. 样品浓度与基质

• 浓度范围：常规 0.1 μg/mL～10 μg/mL；痕量可低至 ng/mL 级，最高不超 10 μg/mL（防污染 / 过载）

• 样品量：液体≥0.5 mL（内衬管可少至 50 μL）；固体≥20 mg（纯品 / 提取物）

• 基质要求：

• 无非挥发性盐（磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐）、表面活性剂、高浓度 DMSO/DMF/THF（强离子抑制 + 仪器污染）

• 液体需透明均一，过 0.22 μm 滤膜；pH 中性 / 弱酸碱（避免强腐蚀）

3. 溶剂兼容性（MS 级）

• ✅ 推荐：甲醇、乙腈、水、甲酸（0.1%）、乙酸、氨水（≤0.5%）

• ❌ 禁止：无机强酸（HCl/H₂SO₄）、强碱、磷酸盐缓冲液、高盐、表面活性剂

二、仪器与方法学关键参数（靶向测试）

1. 质量精度与分辨率（核心）

• 质量精度：外标校准 ≤3 ppm；内标（锁峰）≤1 ppm（24 h 稳定）Thermo Fisher Scientific

• 分辨率（FWHM）：

• 一级（Full Scan）：70,000～120,000 @ m/z 200

• 二级（MS²/PRM）：17,500～35,000 @ m/z 200

• 质量范围：m/z 50～6000（覆盖小分子～多肽）

2. 离子源条件（以 HESI/ESI 为例）

• 源温：ESI 250～350℃；HESI 300～400℃

• 喷雾电压：正离子 +2.8～+3.5 kV；负离子 -2.5～-3.0 kV

• 鞘气 / 辅助气：N₂（纯度≥99.999%），鞘气 30～50 arb，辅助气 5～15 arb

3. 扫描模式（靶向）

• PRM（平行反应监测）：高灵敏、高特异，适合已知靶向物定量；需确定母离子→子离子对及碰撞能量（HCD）Thermo Fisher Scientific

• Full Scan + 精确质量提取（XIC）：适合多靶标同时筛查，提取窗口 ±5 ppmThermo Fisher Scientific

• SIM（选择离子监测）：超痕量（pg/mL 级），但仅一级，无结构确证Thermo Fisher Scientific

三、定性与定量确证标准（必须满足）

1. 定性（靶向物鉴定）

• 精确质量匹配：实测 m/z 与理论值偏差 ≤3 ppm（内标 ≤1 ppm）Thermo Fisher Scientific

• 同位素分布匹配：同位素峰形、丰度比与理论值相似度≥90%

• 二级碎片匹配：特征碎片离子（≥2 个）的 m/z 与标准品 / 数据库一致，相对丰度比符合

• 保留时间匹配：与标准品 RT 偏差 ≤0.1 min（LC 体系）

2. 定量（靶向物含量）

• 校准曲线：r²≥0.995，5～7 个浓度点（含零点）

• 内标要求：优先同位素标记内标（如 ¹³C/¹⁵N），校正基质效应与仪器波动

• 精密度：RSD ≤15%（低浓度 ≤20%）

• 准确度：回收率 85%～115%（痕量 70%～130%）Thermo Fisher Scientific

四、送样与操作禁忌

1. 必须提供：靶向物标准品（≥1 mg）（用于校准、RT 确认、碎片库建立）

2. 禁止：

• 含高盐 / 非挥发性缓冲液样品（直接进样）

• DMSO、DMF、THF 纯溶剂或高比例（>10%）

• 强酸碱、表面活性剂、聚合物

3. 样品保存：4℃冷藏（≤24 h）或 -20℃冷冻（长期），避免反复冻融

五、常见靶向物类型适配要点

• 小分子（农残 / 兽药 / 药物）：ESI±、PRM、分辨率 70k/17.5k，浓度 0.1～10 μg/mL

• 代谢物（生物样本）：HESI、Full Scan+XIC、内标定量，浓度 ng/mL～μg/mLThermo Fisher Scientific

• 多肽 / 蛋白：ESI+、分辨率 120k/35k、m/z 600～2000，浓度 1～5 μg/mLThermo Fisher Scientific